一、tNGS技術(shù)原理

tNGS是一種基于超多重PCR擴(kuò)增（或靶向捕獲）與高通量測(cè)序兩種技術(shù)結(jié)合的新一代測(cè)序技術(shù)。它使用大量針對(duì)特定基因序列的引物/探針對(duì)待測(cè)樣品中抽提出的核酸進(jìn)行超多重PCR擴(kuò)增/探針捕獲，獲得大量目標(biāo)核酸片段，再對(duì)這些目標(biāo)核酸片段進(jìn)行高通量測(cè)序，然后對(duì)所得序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣本中的核酸進(jìn)行高靈敏以及高分辨率的識(shí)別。

二、tNGS優(yōu)點(diǎn)

1. 針對(duì)性強(qiáng)：tNGS只針對(duì)特定基因序列進(jìn)行測(cè)序，因此可以大大減少測(cè)序數(shù)據(jù)量，提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。

2. 高靈敏度：由于tNGS可以對(duì)低濃度的病原微生物進(jìn)行檢測(cè)，因此具有高靈敏度。

3. 高分辨率：tNGS能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)病原體特定基因的高分辨率識(shí)別，有助于精準(zhǔn)診斷。

4. 成本低：與mNGS相比，tNGS的測(cè)序數(shù)據(jù)量更少，因此成本更低。

三、tNGS缺點(diǎn)

1. ?漏檢非靶向基因?：tNGS技術(shù)只能檢測(cè)預(yù)設(shè)的目標(biāo)序列，無(wú)法檢測(cè)非預(yù)設(shè)的病原體。

2. ?文庫(kù)制備復(fù)雜?：文庫(kù)制備過(guò)程需要更多的時(shí)間和試劑，且操作較為復(fù)雜。

四、tNGS應(yīng)用場(chǎng)景

1. ?感染性疾病診斷?：tNGS技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)臨床樣本中的多種病原微生物，特別是對(duì)低濃度的病原微生物及其毒力和耐藥基因的檢測(cè)具有顯著優(yōu)勢(shì)。這種方法不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)，直接對(duì)樣本中的幾十種至幾百種已知病原微生物及其毒力和/或耐藥基因進(jìn)行富集，再進(jìn)行高通量測(cè)序，然后與數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析，從而提供客觀的診斷依據(jù)?。

2. ?耐藥結(jié)核病檢測(cè)?：tNGS技術(shù)在耐藥結(jié)核病檢測(cè)中表現(xiàn)出色。世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布的報(bào)告指出，tNGS技術(shù)能夠有效檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，具有較高的診斷準(zhǔn)確性和成本效益。盡管傳統(tǒng)分子診斷技術(shù)已廣泛應(yīng)用，但tNGS技術(shù)提供了更全面的檢測(cè)范圍，解決了部分藥物檢測(cè)的盲區(qū)，特別是在多耐藥結(jié)核病的判定上具有顯著優(yōu)勢(shì)?。

3.?呼吸道病原體檢測(cè)?：tNGS技術(shù)也被應(yīng)用于呼吸道病原體的檢測(cè)。例如，精準(zhǔn)分子醫(yī)學(xué)中心開(kāi)展的呼吸道病原體靶向測(cè)序（tNGS）檢測(cè)項(xiàng)目，能夠覆蓋常見(jiàn)的呼吸道病原微生物，包括細(xì)菌、病毒、真菌等，輔助指導(dǎo)臨床用藥。該技術(shù)不僅提高了診斷的準(zhǔn)確性，還提供了耐藥基因的檢測(cè)報(bào)告，有助于精準(zhǔn)治療。

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